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酶標(biāo)板簡介
來源: | 作者:muchen | 發(fā)布時(shí)間: 2021-08-05 | 674 次瀏覽 | 分享到:
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酶標(biāo)板(ELISA PLATE)在酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)中,參與免疫學(xué)反應(yīng)的抗原、抗體、標(biāo)記抗體或抗原的純度、濃度和比例;緩沖液種類、濃度和離子強(qiáng)度、pH值和反應(yīng)溫度、時(shí)間等條件起著關(guān)鍵作用。

作為載體的固相聚苯乙烯(Polystyrene)表面對(duì)抗原、抗體或抗原抗體復(fù)合物的吸附也起著重要作用。
抗原、抗體和其它生物分子通過多種機(jī)制吸附至載體表面,這包括通過疏水鍵、流水/離子鍵的被動(dòng)吸附,通過引入其它活性基團(tuán)如氨基和碳基的共價(jià)結(jié)合,以及通過表面改性后的親水鍵結(jié)合

分類
類型主要根據(jù)酶標(biāo)儀進(jìn)行選擇。又分可拆和不可拆的,對(duì)于不可拆的,就是一整塊板上的板條都是連在一起的,那么可拆的就是板子上面的板條是分開的,分出來的板條又有12孔和8孔之分。一般用的較多的是可拆的酶標(biāo)板,如果你之前買了一些這樣的板子,那么完全可以只買些酶標(biāo)板條就可以了。不同的廠家做出來的酶標(biāo)板雖然整體看上去是差不多的,但是有些小的細(xì)節(jié)方面會(huì)做的不一樣,比如結(jié)構(gòu)等,這主要是因?yàn)橐浜喜煌笜?biāo)儀使用,因此,當(dāng)你在選擇購買酶標(biāo)板時(shí)還要考慮一下你的酶標(biāo)儀是什么樣子。不過一般都是適配的,只有個(gè)別的會(huì)有所不同。 因?yàn)槊笜?biāo)板的材質(zhì)一般為聚苯乙烯(PS),而聚苯乙烯的化學(xué)穩(wěn)定性較差,可以被多種有機(jī)溶劑(如:芳烴、鹵代烴等)溶解,會(huì)被強(qiáng)酸強(qiáng)堿腐蝕,不抗油脂,在受到紫外光照射后易變色,所以在使用過程中一定要注意這些。

高結(jié)合力酶標(biāo)板
酶標(biāo)板經(jīng)表面處理后蛋白結(jié)合能力大大増強(qiáng),可達(dá)300-400ng 1gG/cm2,主要結(jié)合的蛋白分子量>10kD。使用該類酶標(biāo)板可提高敏感性,并可相對(duì)減少包被蛋白的濃度和用量,不足之處為較易產(chǎn)生非特異性反應(yīng)。抗原或抗體包被后,以非離子去污劑無法有效地封閉未結(jié)合蛋白的部位,需使用蛋白作為封閉劑。

中結(jié)合力酶標(biāo)板
酶標(biāo)板經(jīng)表面疏水鍵被動(dòng)與白結(jié)合,適合作為分子量20D的大分子蛋白的固相載體,其蛋白結(jié)合能力為200-300 ng 1gG/cm2。由于該類酶標(biāo)板所具有的僅與大分子結(jié)合的特性,適用于作為未純化抗體或抗原的固相載體,可降低潛在的非特異性交又反應(yīng)。該類板可以惰性蛋白或非離子去污劑作為封閉液

氨基化酶標(biāo)板
醇標(biāo)板經(jīng)表面改性處理后擁有帶正電荷的氨基,其疏水鍵由殺水鍵取代。該類晦標(biāo)板適合作為小分子蛋白的固相載體。使用合適的緩沖液和pH值,其表面可通過離子鍵與帶負(fù)電荷的小分子結(jié)合。由于其表面的親水特性和可通過其它交聯(lián)劑共價(jià)結(jié)合的能力,可用于固定溶于 Triton-100、 Tween20等去污劑的蛋白分子。該類板的缺陷為由于降低了疏水性,一部分蛋白分子無法結(jié)合;此外,其表面需有效地封閉。由于親水和共價(jià)的表面特性,使用的封閉液必須能夠與非反應(yīng)性氨基基團(tuán)和所選擇的交聯(lián)劑中任何功能基團(tuán)發(fā)生作用。

酶標(biāo)板的蛋白質(zhì)吸附性測定
可以使用已知濃度的某蛋白溶液,在ELISA用的空白聚苯乙烯板上進(jìn)行包被。包被結(jié)束后測定孔內(nèi)溶液的蛋白濃度,包被前孔內(nèi)蛋白量減去包被后的蛋白量就是吸附在酶標(biāo)板上的蛋白量。這樣就可以知道酶標(biāo)板的吸附性。


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